(3)对人禽流感预警病例的阴性结果进行复核、确认;
(4)对SARS预警病例进行SARS和人禽流感检测和排查。
三、标本采集
1.标本采集人员。
医疗或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集,标本采集人员需注意做好个人防护,并填写标本登记表。
2.标本采集种类和要求。
(1)采集标本的种类:包括咽鼻拭子或含漱液、下呼吸道标本(如气道分泌物、气道吸取物)和血清,根据实际情况还可采集粪便以及死亡病例的心、肝、脾、肺、肾、脑和淋巴结等组织。所有采集的标本应立即分装,一式三份,如果不能立即送检,24小时内应冷藏保存。
(2)采集标本时间。
咽、鼻拭子或含漱液应在发热后3天内采集。出现肺炎症状后尽可能采集下呼吸道标本。病人死亡后,如有必要应尽快采集尸体肺组织等标本。
急性期血清在发病后7天内采集越早越好,恢复期血清须在发病后2~4周采集。
(3)标本登记表的填写。
标本登记表所有内容均对实验室的检测有重要意义,应在采集时由采集人员认真填写。
3.标本的保存:采集的标本应在24小时内送到实验室检测,除一份用于检测外,其余则应尽快放在-70℃以下保存。无-70 ℃条件的需在-20℃冰箱短时间暂存,并尽快联系上送。
4.标本采集的方法:参照《广东省非典型肺炎检测标本采集指南》和《广东省人禽流感防治应急预案》。
四、标本包装、运送与接收
1.标本的包装。
(1)标本必须放在大小适当的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里,拧紧。
(2)将密闭后的标本外包吸水物质,放入大小适当的塑料袋内密封;每袋装一份标本。
(3)在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、姓名,同时也将标本有关信息填在标本送检登记表上。
(4)将装标本的密封袋放入专用运输箱内,放入冰排,然后以柔软物质填充,内衬具缓冲能力的材料。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个塑料袋内再次做密封。所有容器必须印有生物危险标识。
2.标本运送。
按照《
病原微生物实验室生物安全管理条例》和卫生部的有关规定进行标本的运送。
3.标本的接收。
需送省CDC实验室检测的标本,在低温保存条件下,于24小时内送至省CDC进行复核,标本应一式两份。
五、不明原因肺炎标本的实验室检测
1.检测工作流程。
(1)人禽流感预警病例应同时进行甲型流感、禽H5亚型流感病毒的核酸检测:
①检测结果任一项为阳性均需立即上送省CDC复查;
②结果均为阴性,但流行病学和临床诊断再次分析后仍无法排除的,应重新采样,连同前次标本一起上送省CDC复核;
③复核结果仍为阴性的,根据临床和流行病学分析结果可以考虑进行SARS冠状病毒检测;
④采集病人恢复期血清通过微量中和试验或单扩溶血试验,以最终排除人禽流感。
(2)SARS预警病例应由省CDC进行核酸、抗原和抗体检测,所有结果均为阴性,可报告阴性结果,必要时进行人禽流感病毒排查。
(3)其余不明原因肺炎病例需同时进行人禽流感病毒核酸、抗体和SARS冠状病毒核酸、抗原、抗体检测,结果为阴性可报告未检出;市级疾控中心发现任一结果阳性均需将所有标本上送省CDC复查。
2.人禽流感检测。
(1)核酸检测采用real-time PCR方法,进行甲型流感、禽H5亚型流感病毒的快速检测,建议使用深圳科润达生物工程股份有限公司生产real-time PCR 试剂盒;病毒RNA 提取试剂盒,建议使用德国QIAGEN公司的Viral RNA Mini Kit。
(2)抗体检测采用血凝抑制试验,具体方法参见《广东省人禽流感防治应急预案》。
(3)中和抗体检测:采用微量中和试验进行检测,具体方法参见《禽流感实验室检测技术方案》。
3.SARS冠状病毒检测
(1)SARS核酸检测可使用常规RT-PCR或深圳匹基生物工程股份有限公司生产的SARS病毒real-time PCR检测试剂盒。病毒核酸提取试剂建议使用德国QIAGEN的Viral RNA Mini Kit。
(2)抗体检测推荐使用北京华大吉比艾生物技术有限公司生产的SARS病毒抗体检测试剂盒(ELISA),包括IgM和IgG抗体两种试剂盒。在进行IgM检测时可能会出现假阳性,注意采集双相血清观察抗体滴度是否出现升高。