*表示80%以上的样品应来自于奶牛。
五、检测方法
免疫组织化学方法、酶联免疫吸附（ELISA）方法、免疫印迹方法和组织病理学方法。ELISA方法为筛检方法，免疫组织化学方法和免疫印迹方法为确诊方法，组织病理学方法为辅助诊断方法。
六、监测结果处理与报告
（一）各检测实验室检测完样品后应及时向送样单位出具检验报告，并保存好相关实验记录。
（二）各省份动物疫病预防控制机构在11月30日前向农业部兽医局提交年度监测报告，并抄送国家牛海绵状脑病参考实验室。报告内容包括：
1.检查的各种易感动物总数及其年龄结构；
2.每种易感动物总的死亡率和由神经性疾病造成的死亡率；
3.临床检查与流行病学调查的牛的数量与结果；
4.除牛科动物以外感染传染性海绵状脑病（TSEs）的信息；
5.牛海绵状脑病相关知识的教育培训情况；
6.进口和饲喂肉骨粉的情况。
（三）各检测实验室发现疑似样品，应及时送国家牛海绵状脑病参考实验室确诊。
（四）中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室在11月30日前将年度检测结果汇总送国家牛海绵状脑病参考实验室。
（五）国家牛海绵状脑病参考实验室汇总各方面信息后，形成年度监测报告，于12月31日前报农业部兽医局。参考实验室一旦发现阳性结果，应按规定立即报告农业部兽医局。
附录1：
牛海绵状脑病简介
一、病原学
（一）病原体分类
牛海绵状脑病（BSE）病原是一种不同寻常的传染因子，该因子与绵羊或山羊痒病的致病因子十分相似。由于PrP（Prion Protein，Protease resistant Protein，译为“朊粒蛋白”、“朊病毒”）是唯一可检测到的与本病感染有关的大分子，因此用Prion来表示这一感染性蛋白。该蛋白是一种正常宿主蛋白的异构体，与原宿主蛋白相比，对蛋白酶具有较强的抵抗力。
（二）对理化作用的抵抗力
温度：可低温或冷冻保存。物理灭活方法为高压灭菌134-138℃18分钟（该温度范围不一定能使之完全失活）。
pH：在较宽的pH范围内稳定。
消毒剂：用含2%有效氯的次氯酸钠或2mol/L的氢氧化钠溶液，20℃作用1小时以上用于表面消毒，作用过夜用于设备消毒。
存活力：推荐的消毒方法可使滴度降低，但对高滴度的材料，如果病原体处于干燥有机物保护之下或存在于醛类固定的组织之中，则该方法可能不完全有效。宰后组织中的病原因子经过油渣提炼的多种过程后仍能存活。仓鼠痒病因子的感染性在土壤中可维持三年，在360℃的干热条件下仍可存活1小时。
二、流行病学
英国流行该病时，发病率一直很低。在感染的牛群中，最大年发病率为3%。BSE为致死性疾病。
（一）宿主
1.牛科[家牛、非洲林羚（nyala）、大羚羊（Kudu）以及瞪羚、白羚、金牛羚、弯月角羚和美欧野牛]
2.猫科（家猫、猎豹、美洲山狮、虎猫和虎）
3.实验条件下可感染牛、猪、绵羊、山羊、鼠、貂、长尾猴和短尾猴。
（二）传播
1.饲喂含染病肉骨粉（MBM）的饲料可引发BSE。
2.医源性BSE尚未见报道，但这是一种潜在的传播途径。
3.感染母牛产的牛犊有母源感染BSE的危险，其生物学机制尚不清楚，但这种作用在流行病学上无关紧要。
4.尚无证据表明BSE可水平传播。
5.人的新变异型克雅氏病（CJD）的发生提示，食入途径可能会引起人发病。
（三）病原体存在部位
自然发生的临床感染病例，其病原体主要存在于中枢神经系统（包括眼睛）。实验感染牛的回肠末端可检测到病原活性，这可能与网状淋巴组织有关。
（四）发生情况
最早流行起源于英国，随后由于英国BSE感染牛或肉骨粉的出口，引起欧洲、北美、亚洲的25个国家发生BSE。
三、诊断
平均潜伏期为4-5年。
（一）临床诊断
以亚急性或慢性、进行性失调为其主要特征，主要的临床症状为神经性表现：不安、恐惧、异常震惊或沉郁；感觉或反应过敏；不自主运动，如肌肉抽搐、震颤和痉挛；步态共济失调，包括四肢伸展过度；植物神经机能障碍，如反刍减少、心动过缓、心律改变；体重和体况下降。
（二）病变
无大体解剖病变，显微镜下可见海绵状空泡病变。
（三）鉴别诊断
低镁血症，神经性酮病，李斯特菌引起的脑病或其它脑病，脑灰质软化或脑皮质坏死，颅内肿瘤。
（四）实验室诊断
1.病原分离与鉴定
尚缺乏BSE病原的诊断试验。生物学实验，即用感染牛或其它动物的脑组织通过非胃肠道途径接种小鼠，是目前检测感染性的唯一方法。但这一方法很不实用，因为潜伏期至少有300天。
2.血清学试验
由于在BSE或其他传染性脑病中检测不到免疫反应，因而无法使用血清学试验。
3.其它试验
临床感染病牛的脑组织病理学检查，可见特征性的两侧对称的灰质海面状变化，进一步用免疫组化方法可发现疾病特异性PrP的蓄积。
快速检测方法有：ELISA方法和免疫印迹方法，均检测病原。
四、预防和控制
本病尚无有效疗法，对临诊疑似病牛必须采用注射致死法扑杀以避免脑组织诊断样本的破坏。
五、卫生预防
（一）无BSE国家。对出现神经性症状牛的病例进行采样送检，对进口反刍动物及其产品进行跟踪和采样送检。
（二）有BSE国家。对确诊的病例进行扑杀和补偿，对哺乳动物蛋白的回收利用进行控制，对牛进行有效的身份标记和追踪。
六、医学防护
处理疑似BSE动物组织的实验室工作人员，应穿戴相应的防护服并需严格遵守操作规范，以免接触这些对理化处理有着高度抵抗力的病原体。新变异CJD病的发生表明BSE 病原对人具有感染性。BSE不是空气接触传染性疾病，因此实验室处理基本上是为了避免意外的医源性感染、眼睛口鼻和手的直接接触。
附录2：
临床监测登记表
监测人： 单位（盖章）：
巡查时间
| 巡查牛群数量
| 巡查
牛只数量
| 神经症状
牛数量
| 死牛数量
（2岁以上）
| 采样数量
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附录3：
牛海绵状脑病普查采样单
采样单编号：第___
张 编制：国家牛海绵状脑病参考实验室
品保存条件：甲醛固定 □ -18℃以下冷冻 □
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样品类别：脑 □ 其它_________
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采样地点： 省（市） 县 乡
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样 品
编 号
| 种 类
| 年龄
| 健康状况
| 备注
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奶牛
| 肉牛
| 兼用牛
| 正 常 屠 宰
| 非正常屠宰*
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死牛
| 急 宰
| 疑 似
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| *若为非正常屠宰牛请继续填写《非正常屠宰牛登记单》，样品编号要
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注释：1.采样地点相同的样品可以登记在同一张采样单上。样品编号采用地名首字母＋数字表示，例如青岛1号写为QD-1，此号必须与样品包装编号对应。
2.请详细填写采样单位名称、电话、地址等信息。
3.有些选项可以打“√”表示。
采样单位（委托采样单位）名称：（盖章） 电话：
采样单位（委托采样单位）地址： 邮编：
采样人（委托采样人）
签名： 年 月 日
送样单位（运送单位）名称：（盖章） 电话：
送样单位（运送单位）地址： 邮编：
送样人（委托送样人）
签名： 年 月 日
此单一式3份，一份随样品封存，另两份分别由采样单位和送样单位保存。
附录4：
非正常屠宰牛登记表
样品编号： 编制：国家牛海绵状脑病参考实验室
保存条件：甲醛固定 □ -18℃以下保存 □ 样品类别：脑 □ 其它_________ 年龄：___________
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牛的种类：奶牛 □ 肉牛 □ 兼用牛 □ 健康状况：临床疑似牛 □ 紧急屠宰牛 □ 死牛 □
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采样地点： 省（市） 县 乡 村
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详细描述：
年龄判断依据：牙齿 □ 养殖档案 □ 曾饲喂肉骨粉：是 □ 否 □ 性别：母 □ 公 □
品种：___________________ 原产国___________________ 耳标____________________
畜主/养殖场___________________________________________________________________
临床疑似牛（由不明原因引起的渐进性行为变化或神经症状，表现如下）：
1． 行为表现：甩头 □ 磨牙 □ 过度舔舌 □ 耳朵竖立 □ 行为改变，如落伍 □
挤奶时持续踢踏 □ 经常伸展脖子 □ 像拉马车样低头站立 □
面对舍门或障碍物犹豫不前 □ 不愿进挤奶室 □ 走路时后肢过度摇摆或伸展 □
2. 神经症状：颤抖 □ 兴奋 □ 胆怯 □ 恐惧 □ 狂怒 □
意识异常 □ 转圈运动 □ 共济失调 □ 瘫痪/局部麻痹 □
感觉过敏如听觉、触觉、视觉 □ 没有外伤或感染而濒临死亡 □
其他
紧急屠宰牛：
倒地不起 □ 斜靠着物体才能站立□ 不愿行动 □ 严重伤病 □ 宰前检疫认为要销毁的牛 □
其他
死牛：
在养殖场死的 □ 在运输过程中死的 □ 在其他地方死的 |
其他描述：
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照片：
每省至少要对20%的临床疑似牛进行拍照或摄像，并收集临床疑似牛的其他材料如档案等。若为数码照片，则可以给照片的名称命名为对应的样品编号，然后以电子方式或相片（背面要标明样品编号）发送给BSE检测实验室。若不是数码照片，则洗出来，在其背面用圆珠笔或记号笔注明样品编号，与采样单一并交给BSE检测实验室。
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附录5：
采样与送样方案
牛羊脑样品既可以按甲醛固定处理，也可以按冷冻保存处理，然后运送至国家认定的检测实验室进行检测。具体方法见“方案一：新鲜牛羊脑样品的采集与运送方案”和“方案二：甲醛固定的牛羊脑样品的采集与运送方案”。国家牛海绵状脑病参考实验室建议采用方案一进行采样和运送，该方案也是当前国际上广泛采纳的方案。
方案一：新鲜牛羊脑样品的采集与运送方案
1.专用采样工具采集牛羊脑样品的特点：
国家牛海绵状脑病参考实验室根据国际上通用的牛羊脑采样工具设计出我国的牛羊脑样品采样工具。该工具为塑料制品，呈勺子形状，前端带有锋利的齿，便于切断脑组织。这种采样工具使用简单、节约成本、工作效率高、机动性强、采样安全。
2.采样物品准备：
数码照相机（或数码摄像机）、专用的采样勺（一把勺子最多可以采集三份样品，牛脑采样勺为蓝色，羊脑采样勺为黄色）、医用剪刀（一把，长10cm左右）、一次性手套、橡胶检查手套（即乳胶手套）、口罩、工作服、样品杯（可向参考实验室索取）、记号笔、冰袋（至少3块大号的冰袋）、大号的透明胶带、带盖泡沫箱（有厚度，无破损，大小适中）、签字笔或圆珠笔、采样单、吸水纸等。
